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分子生物学实验室常用仪器

分子生物学实验室常用仪器

作者:admin    来源:本站    发布时间:2019-04-24 03:22:07    浏览量4257
一、电泳仪

电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳大类,自由界面电泳不需支持物,如等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。区带电泳需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶―G薄层等,分子生物学实验中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。应用电泳法可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备。

1.使用方法

(1)按电源开关,显示屏出现“电泳仪…”等字样后,同时系统初始化,蜂鸣4声,设置常设置。屏幕转成参数设置状态,见图一:

U: 0V U=100V|Mode:STD

I: 0mA I=50mA|

P: 0W P=50W|

T: 00:00 T=01:00|


其中:左侧大写U: I: P: T:为电泳时实际值;中间部分显示程序的常设值(预置值)。Mode(模式):STD(标准);TIME(定时);VH(伏时);STEP(分步)

(2)设置工作程序。用键盘输入新的工作程序。例如,要求工作电压U=1000V,电流I限制在200mA以内,功率W限制在100W以内,时间T为3小时20分,并且到时间自动关掉输出。则操作步骤如下:

①按“模式”键,将工作模式由标准(STD)转为定时(TIME)

模式。每按一下模式键,其工作方式按下列顺序改变:STDTIMEVHSTEPSTD。

②先设置电压U,按“选择”键,先将其反显,然后输入数字键即可设置该参数的数值。按数字1000,则电压即设置完成。

③设置电流I,按“选择”键,先使I反显,然后输入数字200。

④设置功率P,按“选择”键,先使P反显,然后输入数字100。

⑤设置时间T,按“选择”键,先使T反显,然后输入数字320。如果输入错误,可以按“清除”键,再重新输入。

⑥确认各参数无误后,按“启动”键,启动电泳仪输出程序。在显示屏状态栏中显示Start!并蜂鸣4声,提醒操作者电泳仪将输出高电压,注意安全。之后逐渐将输出电压加至设置值。同时在状态栏中显示“Run”,并有两个不断闪烁的高压符号,表示端口已有电压输出。在状态栏最下方,显示实际的工作时间(精确到秒)。

⑦每次启动输出时,仪器自动将此时的设置数值存入“MO”号存储单元。以后需要调用时可以按“读取”键,再按“0”键,按“确定”键,即可将上次设置的工作程序取出执行。

⑧电泳结束,仪器显示:“END”,并连续蜂鸣提醒。此时按任一键可止鸣。

2.注意事项

(1)U、I、P三个参数的有效输入范围是:U:5~3000V;I:4~400mA;P:4~400W.

(2)一般情况下,当No Load!时,首先应关机检查电极导线与电泳槽之间是否有接触不良的地方,可以用万用表的欧姆档逐段测量。

(3)如果输出端接多个电泳槽,则仪器显示的电流数值为各槽电流之和,此时应选择稳压输出,以减小各槽的相互影响。

(4)注意保持仪器的清洁,不要遮挡仪器后方进风通道。严禁将电泳槽放在仪器顶部,避免缓冲液洒进仪器内部。

(5)本仪器输出电压较高,使用中应不避免接触输出回路及电泳槽内部,以免发生危险。

(6)长期不用仪器,应放置在干燥通风的清洁环境中保存。
二、分析天平

分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器,充分了解仪器性能及熟练掌握其使用方法,是获得可靠分析结果的保证。分析天平的种类很多,有普通分析天平、半自动/全自动电光分析天平及电子分析天平等。

1.使用方法

(1)检查并调整天平至水平位置。检查电源电压是否匹配(使用配置的稳压器),按天平仪器要求通电预热至所需时间30min。

(2)打开天平开关“on”,天平则自动进行灵敏度及零点调节。待显示屏上所有字段短时点亮,天平回零时,可进行正式称量。

(3)称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上,关上侧门,天平将显示该重量,点击“O/T¬”键自动校对零,然后逐渐加入待称物质,直至所需重量为止。

(4)称量结束应及时除去称量瓶(纸),关上侧门,切断电源,并做好使用情况登记。

2.注意事项

(1)天平应放置在牢固平稳水泥台或木台上,室内要求清洁、干燥,同时应避免光线直接照射到天平上。

(2)称量时应从侧门取放物质,读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。

(3)挥发性、腐蚀性、强酸强碱类物质应盛于带盖称量瓶内称量,防止腐蚀天平。

(4)电子分析天平若长时间不使用,则应定时通电预热,每周一次,每次预热2h,以确保仪器始终处于良好使用状态。

三、分光光度计

不同物质对不同波长入射的吸收程度各不相同,从而形成各具特征的吸收光谱。根据这一原理,应用比色法可以对某些有色物质进行定性或定量分析。但由于比色法仅限于可见光区,而且精度低,已远远不能满足高精度微量分析的要求。随着科学技术不断发展,分析仪器也不断地更新换代,人们引进了分光光度法的概念,分光光度计随之应用。分光光度计由光源、单色器、吸收池、接受器、显示屏幕所组成,它不仅适应于可见光区,同时还扩展至紫外光区及红外光区。光密度(OD)是许多溶液中的溶质定量的指标之一,通过所产生的单色光而测定某一溶液对该单色光的吸收值。



四、PCR仪

PCR仪,也称DNA热循环仪、基因扩增仪,它是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧,从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段,它的每一循环包括在三种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程。

PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域,如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等。随着分子生物学的不断发展,PCR扩增技术也得到普及推广应用,因此了解PCR仪的性能,熟练掌握仪器的正确使用方法及使用过程中的注意事项,将是十分必要的。

现介绍PCR扩增仪的使用方法和注意事项。

1.使用方法

(1)接通电源开关,仪器进入准备状态;在显示屏上记录了当前仪器的温度和盖子(Lid)的温度。若仪器正在运行时,须按“B”键(start/stop),才能退出运行并返回准备状态。

(2)编写程序段。在准备状态下按“C”键(programs)进入编程状态,选定一程序号,然后按“enter”键,进入下一程序;按“A”(list)键后,选一文件号(empty program);再按“enter”键,进入下一程序;按“ABC”键,进入下一程序,用上下左右键号选择一个字母(A、B、C、D、…),然后按“enter”键,进入下一程序;按“name ok”键,完成文件命名。

(3)设定盖子的温度。“lid temp:℃”,盖子的温度一般比变性温度要高10℃,例如变性温度是95℃,那么盖子的温度就要设定为105℃。待盖子预热后按“enter”键,进入下一程序。

(4)设定变性温度、变性时间、延伸温度、延伸时间、退火温度、退火时间及循环总数等参数。从第一步依次按“enter”键进入,用四个移位键移动设定位置。先设定温度,后设定时间,全部参数设置完后,按“pgm ok”键,所设定的程序自动被保存。

(5)运行程序。检查设定是否正确,按“start”键,选择设定好的程序,开始运行。显示屏上可观察到系统运行的情况,按“Stop”可停止运行。

五、成像系统

本系统属全自动电脑控制影像分析系统,主要拍摄核酸的agarose电泳胶片,及蛋白质的acrylamide电泳胶片。在与markers比较后,可精确计算样本的分子量,对核酸电泳也可准确定量,是分子生物学及生化蛋白试验的重要检测工具。本系统包括暗箱,紫外透射仪,摄像头,变焦镜,电脑以及专业凝胶图象采集及分析.软件(3.3版)。该软件提供对电泳凝胶、斑点测量、PCR密度的定量分析等。此外,还提供图像采集、标注、打印、数据和图像发送到Word、Excel、图像处理等功能。

1.使用方法

(1)打开电脑,启动凝胶分析软件,进入用户界面。

(2)打开采集凝胶图像的暗箱装置电源开关,放入凝胶,打开紫外光源或白光光源,将采集装置与电脑上采集卡相连,然后选择“文件”菜单中的“图像采集”或工具栏的“图像采集”按钮,出现图像窗口:“开始采集”、“停止采集”、“采集图像”等。如果图像不清晰,可以调节暗箱上的变焦镜,使之清晰。可直接将图像保存起来,也可通过“图像处理”对图像进行旋转、裁剪、滤波、调节对比度……方面的处理。

(3)对读入的电泳凝胶图像,可以启动电泳凝胶分析系统。在“功能选择”菜单中选择“电泳凝胶”或在工具栏上的“电泳凝胶”工具,将出现泳道分析工具栏,并在“图像显示”子窗口中出现一个红色的矩形框。还可进入“条带分析”系统,对条带进行编号,对二条以上的条带进行比较。

(4)采集图像结束后,关闭暗箱电源开关,从暗箱中取出凝胶,并将玻璃板清洗干净,晾干。
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